cck8实验步骤

 时间:2024-10-26 08:33:36

1、一. 制作标准曲线(测定细胞具体数量)1、首先用细胞计数板计数所制备的细胞悬液中的细胞数量,然后接种细胞到培养板内。2、按照比例(例如:1/2比例)依次用培养基等比稀释成一个细胞浓度梯度,一芫王墙错般要做3-5个细胞浓度梯度,每个浓度建议3-6个复孔。3、接种后培养2-4小时使细胞贴壁,然后加CCK试剂培养一定时间后测定OD值,制作出一条以细胞数量为横坐标(X轴),OD值为纵坐标(Y轴)的标准曲线。根据此标准曲线可以测定出未知样品的细胞的数量(使用此标准曲线的前提是实验的条件必须要一致,便于确定细胞的接种数量以及加入CCK后的培养时间。)

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3、用酶标仪测定在450nm处的吸光度。5、若暂时不测定OD值,可以向每孔中加入10 μL 0.1M的HCL溶液或者1% w/v SDS溶液,并遮盖培养板避光保存在室温条件下。24小时内测定,吸光度并不会发生改变。

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5、向每孔加入10μL CCK溶液(注意不要再孔中生成气泡,它们会影响OD值的读数)。5、将培养板在培养箱内孵育1-4小时。6、用酶标仪测定在450nm处的吸光度。7、若暂时不测定OD值,就可以向每孔中加入10 μL 0.1M的HCL溶液或者1% w/v SDS溶液,并遮盖培养板避光保存在室温条件下。24小时内测定,吸光度不会发生变化。

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