哪些因素造成Western Blot发光时荧光“淬灭”？

1、抗体浓度太高，局部过多的HRP会快速消耗底物，导致荧光信号过强，条带呈灼烧样。可降低抗体上样量。

2、抗体浓度太低，荧光信号太弱，可能第一次压片能够获得很弱的条带，再压片就没有什么条带都没有。

3、操作时间过长，膜逐渐干掉。减少操作时间，避免膜干掉。

4、不良的实验习惯导致设备或试剂污染。例如铁锈和不慎沾染的显影液、定影液，会造成荧光淬灭，甚至直接导致无荧光；

5、ECL发光液的质量。除过氧化物因接触空气被逐渐还原外，ECL发光液的成分通常都不稳定。建议选择发光稳定的发光液。