SMART-RACE 技术获得Pm-cycin Y的eDNA方法

 时间:2024-10-12 02:29:09

1、首先,通过逆转录以提取的斑节对虾总RNA为模板,参考SMARTMRACE试剂盒中的逆转录方法合成cDNA第条链。

SMART-RACE 技术获得Pm-cycin Y的eDNA方法

3、然后,用Primer5.0软件设计特异性引物F(5'-TGGGCAACAAACAC-3)和R(S'-GCTATTCTGTCATGATCTTG-3)。以cDNA为模板,对该序列进行验证,经Blast比对,获得开放阅读框序列ORF。

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5、然后,将所得PCR产物稀释100倍,取1μL作为模板,利用引物GSP2(3'GSP2:5'稆糨孝汶;-GCAGAACAGTTATGCCGTAATGGTC-3‘和5'GSP2:5'-TGTGTTTATCCTGGGGGAAGGTCGG-3)和NUP再进行PCR扩增。PCR反应体系为:10xBuffer反应缓冲液2.5μL,10mmol/LdNTP0.5μL,UPM2.5μ,1000UExTaq酶0.5μL,1μLcDNA模板。

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